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miRNA-338-5p 抑制胶质瘤增殖、侵袭的作用及靶向 CTBP2 蛋白的核素显像医学研究

日期:2019-01-02 20:49 作者:绮为论文网 论文字数:3911 点击次数:0
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本文是一篇医学论文,医学,是通过科学或技术的手段处理人体的各种疾病或病变的学科。它是生物学的应用学科,分基础医学、临床医学。

本文是一篇医学论文,医学,是通过科学或技术的手段处理人体的各种疾病或病变的学科。它是生物学的应用学科,分基础医学、临床医学。从解剖层面和分子遗传层面来处理人体疾病的高级科学。它是一个从预防到治疗疾病的系统学科,研究领域大方向包括基础医学、临床医学、法医学、检验医学、预防医学、保健医学、康复医学等。(以上内容来自百度百科)今天为大家推荐一篇医学论文,供大家参考。
 
前 言
 
胶质瘤 (Glioma) 是颅内最常见的恶性肿瘤。全世界每年新发的恶性肿瘤中,约 1.8%为胶质瘤。其每年所致的死亡人数占每年因恶性肿瘤死亡总数的2.3%[1]。根据世界卫生组织(WHO)对神经系统肿瘤的分类,可将其分类为低级别胶质瘤(Low grade glioma, LGG) 和高级别胶质瘤 (High grade glioma,HGG)。低分级胶质瘤一般分化良好,具有良性倾向,并且预后较好。高分级胶质瘤亦称恶性胶质瘤,呈未分化状态,并且预后较很差,老年患者尤甚[2]。据统计,恶性胶质瘤患者被诊断后,1 年后仅有 50%存活,而 2 年后仅为 25%[3]。胶质瘤的发病机制仍不明晰,但是有报道称神经纤维瘤病和结节性硬化症可能会演化为胶质瘤[4]。目前,对胶质瘤患者的治疗大多采取手术、放疗和化疗等治疗方式的联合,但是,效果仍不理想。因此,胶质瘤的诊治仍具有很大的改善空间。寻找新的显像、治疗靶点,提高生存期、降低死亡率是目前的一个热点。miRNA 是一种小分子量的非编码 RNA,长度约为 22 个核苷酸左右,其通过 RNA 沉默和对基因表达转录后期的调控发挥其功能[5, 6]。首个 miRNA 是于1990 年被发现的,但是直到 2000 年代,人们才认识到 miRNA 时一类具有生物调控功能的分子群体。它不仅存在于细胞内,也存在于如血液的细胞外环境之中。miRNA 不仅在人类的各种生理过程(如细胞的増殖、分化、生长、发育和调亡等)发挥重要作用,也在各种病理过程(如肿瘤、心脏病、肾病和神经系统疾病等)中扮演着自己的角色[7-14]。近年来的研究表明:miRNAs 甚至调控着肿瘤的发生、发展和转移[15]。
实际上,首个发现与 miRNA 有关的人类疾病即为肿瘤,Musilova 等发现慢性淋巴细胞白血病患者血液中的 miRNA 含量显著降低[16];Jun 等通过鉴定和分析 334 例不同种类和分期的肿瘤组织和正常组织的 miRNA 的表达谱,发现肿瘤组织的 miRNA 表达谱与正常组织有着显著的区别;Janaiah 等将含有 miR-26a 的病毒载体通过尾静脉注射入肝癌小鼠模型后,发现其能够抑制、甚至消除小鼠体内的肿瘤[17, 18]。在胶质瘤中,也有大量 miRNA 发挥作用的报道,例如,miR-21 高表达于胶质瘤中,并且参与激活细胞活性并且诱导调亡;而 miR-10b 能够调控同源异型盒 D10(HOXD10),进而影响尿激酶纤维蛋白溶酶原激活物受体(uPAR),从而促进胶质瘤的侵袭[19, 20]。近年来,由于相关技术的进展和科学工作者们孜孜不倦的工作,越来越多的人类 miRNA 被人们发现鉴定出来。他们不但会为我们认识肿瘤的发生发展机制提供更深刻的认识,也将会为我们诊断、治疗肿瘤提供的更多的机会与思路。核医学显像技术是近年来发展极为迅速的一种显像技术。通过该技术,我们可以清晰的了解到器官、病变组织的解剖结构和功能代谢状态。靶向核医学显像通过标记靶点的配体,可以帮助我们寻找感兴趣靶点,提供直观的疾病位置及功能状态信息。对于靶点的成功显像将为疾病的诊断、治疗及其发生发展机制提供更多的,更关键的信息。
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第 1 章 研究背景
 
1.1 引言
胶质瘤(glioma)是最常见的脑部恶性肿瘤,约占成人脑原发肿瘤的 70%以上。全世界每年新发的恶性肿瘤中,约 1.8%为胶质瘤。其每年所致的死亡人数占每年因恶性肿瘤死亡总数的 2.3%。虽然胶质瘤的具体发病机制尚不明了,但是有报道称神经纤维瘤病和结节性硬化症可能会演化为胶质瘤。WHO 中枢神经系统肿瘤分类将胶质瘤分为低级别胶质瘤(Low grade glioma, LGG) 和高级别胶质瘤(High grade glioma, HGG)。低分级胶质瘤一般分化良好,具有良性倾向,并且预后较好。高分级胶质瘤亦称恶性胶质瘤,呈未分化状态,并且预后较很差,老年患者尤甚。据统计,恶性胶质瘤患者被诊断后,1 年后仅有 50%存活,而 2 年后仅为 25%。此类患者尽管接受大量的化疗和放射治疗,仍会在诊断后的 2 年内死亡。目前,寻找新的显像、治疗靶点,提高生存期、降低死亡率是胶质瘤研究的一个热点。
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1.2 miRNA 的基因结构及生物合成
miRNA是一种具有调控功能的内源性的非编码RNA,其长度约为14 - 22个核酸。在细胞核内, RNA聚合酶转录DNA形成具有帽子结构(7MGpppG)、多聚腺苷酸尾巴(AAAAA)和茎-环结构(Stem-loop structure)的初级miRNA(Pri-miRNA)。通过Drosh-DGcR8复合体剪切Pri-miRNA后,形成具有60-70个核酸长度短的茎环结构的miRNA(pre-miRNA)。随后ExPortins 5将Pre-miRNA从核内转移至细胞质。在 细 胞 质 中 , RNase III Dicer 进 一 步 剪 切 pre-miRNA , 形 成 一 种 称 为miRNA-miRNA双链的二聚体。该双链RN通常约18-25个核酸长度,此时成为成熟的miRNA,之后,双链分开并与相关蛋白催化剂共同结合RISC(RNA-inducedsilencing complex)复合体,发挥RNA酶功能。
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第 3 章 MIRNA-388-5P调控胶质瘤増殖与侵袭的体外机制研究 ....25
3.1 实验材料 ...............25
3.1.1 主要试剂 .........25
3.1.2 实验仪器及设备 .........26
3.2 实验方法 ...............26
3.3 实验结果 ...............37
4 讨论 ..............43
第 4 章 应用噬菌体展示技术筛选 CTBP2 特异性亲和多肽............47
4.1 实验材料和研究方法 .......49
4.1.1 实验材料和检测仪器 .............49
4.1.2 实验试剂和配液 .........50
4.1.3 实验方法 .........51
4.2 实验检测结果 .......56
4.3 结果分析与讨论 ...............59
第 5 章 多肽核素标记及 SPECT 显像研究....61
5.1 实验材料与方法 ...............61
5.2 实验材料和研究方法 .......61
5.3 体内和体外实验结果 .......63
 
第 5 章 多肽核素标记及 SPECT 显像研究
 
核医学显像技术是近年来发展极为迅速的一种显像技术。通过该技术,我们可以清晰的了解到器官、病变组织的解剖结构和功能代谢状态。靶向核医学显像通过标记靶点的配体,可以帮助我们寻找感兴趣靶点,提供直观的疾病位置及功能状态。对于靶点的成功显像将为疾病的诊断、治疗及其发生发展机制提供更多的,更关键的信息。在本部分体内功能相关研究中,我们拟使用99mTc标记携带双功能鳌合剂HYNIC的CTBP2靶向小肽TCB (VSKYHLHSRARL),通过采用TPPTS和 tricine为协同配体,将核素标记药物用于胶质瘤小鼠模型的肿瘤显像,深入评价标记产物的肿瘤靶向结合能力。
 
5.1 实验材料与方法
在 EP 管反应体系中加入溶于去离子水的 60 μL/mL 浓度的 HYNIC-TCB 溶液 20uL,Ltricine 100uL (100 μL/mL,溶于 25 mM 玻拍酸盐溶液 pH 5.0),100 μLTPPTS (50 mg/mL 溶于 25 mM 玻拍酸盐溶液 pH =5.0)10 uL 浓度为 3 mg/mL(溶于 0.1 M HCl)的 SnC12·2H2O,100 μL 体积的99mTcO4-(1 mci),在 90℃条件下进行先期反应 30 分钟。随后使用 C18 过柱纯化,具体流程为:首先使用乙醇(体积为 3 mL)充分淋洗层析柱,随后使用生理盐水(体积为 10 mL)充分冲洗平衡反应体系。然后上样过柱,待检测标本和缓冲液全部层析完成后,使用生理盐水冲洗层析柱,每次 800 μL,冲洗三次。最后使用 400 uL 体积的 80%乙醇淋洗层析柱,收集制备产物于干净的新 EP 管,由此到纯化的放射性核素多肽标记物99mTc-HYNIC-TCB(tricine)(TPPTs)。
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结 论
 
本研究证实了 miR-338-5p 通过 CTBP2 蛋白发挥抑制胶质瘤增殖、侵袭作用的机制;二、通过噬菌体展示肽库技术,我们筛选出靶向 CTBP2 蛋白的特异性小肽TCB,并利用99mTc 进行了核素标记;三、本研究成功利用99mTc-HYNIC-TCB 进行了靶向胶质瘤 CTBP2 蛋白的SPECT 显像,这将为胶质瘤诊断、治疗、及胶质瘤增殖、侵袭作用的机制研究提供更多的,更关键的信息。
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参考文献(略)
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